miRNA 3' UTR靶標(biāo)表達(dá)克隆

通過螢火蟲熒光素酶的活性分析，可獲得miRNA對(duì)潛在靶標(biāo)基因調(diào)控作用的結(jié)果。表達(dá)克隆轉(zhuǎn)錄后形成螢火蟲熒光素酶ORF與3’UTR的嵌合體mRNA，如果有特異的miRNA可與3’－UTR某段序列互補(bǔ)結(jié)合，嵌合體中熒光素酶ORF所編碼蛋白的活性也相應(yīng)受到調(diào)控， 因此通過檢測(cè)熒光素酶的發(fā)光強(qiáng)度就可以定量地測(cè)定miRNA對(duì)應(yīng)靶標(biāo)的mRNA調(diào)控的效果。

miRNA 前體和靶標(biāo)表達(dá)克隆的應(yīng)用

• 基因表達(dá)調(diào)控：通過轉(zhuǎn)染或病毒顆粒感染的方式將單個(gè)或整套的miRNA導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞，進(jìn)行單個(gè)miRNA或多個(gè)miRNA對(duì)基因的表達(dá)調(diào)控。對(duì)miRNA的調(diào)控效應(yīng)和功能進(jìn)行特定條件或體統(tǒng)化的研究
• miRNA靶標(biāo)基因的確認(rèn)和鑒定：利用miRNA靶標(biāo)驗(yàn)證表達(dá)克隆，進(jìn)行大規(guī)模的miRNA作用靶標(biāo)基因的篩選和確證。一個(gè)miRNA可作用的所有靶標(biāo)的基因，和可作用于一個(gè)mRNA的3’－UTR所有miRNA