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美國GeneCopoeia（復(fù)能基因）提供基于*基因組miRNA作用的靶標表達克隆，涵蓋了公共數(shù)據(jù)庫。miRNA靶標表達克隆包含SV40啟動子驅(qū)動的報告基因（螢火蟲熒光素酶）的下游緊接3’－UTR（即miRNA作用位點）序列。第二個報告基因renilla luciferase，可用于監(jiān)測轉(zhuǎn)染，表達效率，并可以作內(nèi)參。

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人類基因組miRNA靶標表達克隆的特點

通過螢火蟲熒光素酶的活性分析，可獲得miRNA對潛在靶標基因調(diào)控作用的結(jié)果。表達克隆轉(zhuǎn)錄后形成螢火蟲熒光素酶ORF與3’UTR的嵌合體mRNA，如果有特異的miRNA可與3’－UTR某段序列互補結(jié)合，嵌合體中熒光素酶ORF所編碼蛋白的活性也相應(yīng)受到調(diào)控，因此通過檢測熒光素酶的發(fā)光強度就可以定量地測定miRNA對應(yīng)靶標的mRNA調(diào)控的效果。

miRNA 前體和靶標表達克隆的應(yīng)用

基因表達調(diào)控：通過轉(zhuǎn)染或病毒顆粒感染的方式將單個或整套的miRNA導(dǎo)入培養(yǎng)細胞，進行單個miRNA或多個miRNA對基因的表達調(diào)控。對miRNA的調(diào)控效應(yīng)和功能進行特定條件或體統(tǒng)化的研究
miRNA靶標基因的確認和鑒定：利用miRNA靶標驗證表達克隆，進行大規(guī)模的miRNA作用靶標基因的篩選和確證。一個miRNA可作用的所有靶標的基因，和可作用于一個mRNA的3’－UTR所有miRNA

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miRNA 3' UTR靶標表達克隆

miRNA 前體和靶標表達克隆的應(yīng)用

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