微量細胞核酸提取中常見的挑戰與解決方案

 

　　微量細胞核酸提取首要挑戰是核酸得率低。微量細胞本身含有的核酸量極少，提取過程中不可避免的吸附損失、離心殘留等問題，會進一步降低最終獲得的核酸量，難以滿足下游PCR、測序等實驗對模板量的需求。對此，可采用優化的提取試劑，如選擇吸附效率更高的硅基磁珠，其能在低濃度下特異性結合核酸，減少吸附損失；同時改進提取流程，縮短離心時間、降低離心轉速，減少核酸在離心管壁的殘留，還可通過增加洗脫次數、提高洗脫溫度（如50-60℃），提升核酸洗脫效率，提高得率。

 

　　核酸純度差是另一大難題。微量細胞樣本中，蛋白質、多糖、脂質等雜質相對含量較高，提取時易與核酸共純化，干擾后續酶促反應。為解決這一問題，需強化樣本預處理環節，加入蛋白酶K可有效降解蛋白質，使用RNase抑制劑避免RNA降解；在純化階段，增加洗滌次數，選用含胍鹽、乙醇的洗滌緩沖液，去除雜質；對于高雜質樣本，可引入核酸純化柱二次純化，進一步提高核酸純度。

 

　　此外，樣本污染風險高也是微量細胞核酸提取中不可忽視的挑戰。微量核酸樣本極易受到外源性核酸（如環境中微生物核酸、操作人員攜帶的核酸）污染，且一旦污染，因樣本量少，污染核酸對實驗結果的干擾更為顯著。為防范污染，需建立嚴格的實驗環境，在超凈工作臺或負壓生物安全柜中進行操作，定期對實驗臺面、儀器進行消毒；使用無核酸酶的實驗耗材和試劑，避免試劑本身攜帶污染；同時設置陰性對照（如空白提取試劑）和陽性對照，實時監測提取過程是否存在污染。

 

　　針對微量細胞核酸提取中的得率、純度、污染等挑戰，通過優化試劑與流程、強化質量控制，可有效提升核酸提取質量，為后續科研與臨床應用奠定堅實基礎。