MicroRNA前體表達克隆

復能基因現(xiàn)在提供:

• 1048條人源、672條小鼠源、408條大鼠源miRNA插入各種表達載體中構(gòu)建的miExpress™ microRNA前體表達克隆。
• miRNA靶標的表達克隆編碼基因的3’端非翻譯區(qū)（3’－UTR）涵蓋了人類編碼基因20000個miRNA靶標表達克隆。（3’－UTR，即編碼基因的3’端非翻譯區(qū)）

利用這些miRNA表達克隆研究相應基因或者蛋白的表達調(diào)節(jié)情況。配合采用熒光素酶報告基因的靶標克隆，可以和miRNA表達克隆一起進行miRNA功能篩選合確證，以及miRNA靶標基因的篩選和確證的交互實驗。

復能基因同時也提供多套的人類基因組和小鼠基因組的全長基因ORF表達克隆。用于miRNA靶標的對應蛋白的功能互補實驗。由于這些ORF克隆不含3’－UTR，可以用于特種miRNA對內(nèi)源靶基因抑制后的拯救實驗，進一步確證miRNA功能及靶標基因。

miExpress™人類基因組的miRNA前體表達克隆       

復能基因采用基于貓免疫缺陷病的慢病毒系統(tǒng)，構(gòu)建了miRNA前體表達克隆的載體骨架。RNA聚合酶III型的H1啟動子驅(qū)動轉(zhuǎn)錄前體miRNA的莖環(huán)前體（大約有150核苷酸長度）。 隨后通過RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。使得在同一載體的CMV啟動子的驅(qū)動下共表達報告基因eGFP，雙順反子下游的新霉素篩選基因也同時表達。可作為監(jiān)測miRNA表達，轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)化的效率的參考標準。

RISC－miRNA復合體通過結(jié)合靶基因的mRNA的3’非編碼區(qū)（3’－UTR）成功地調(diào)節(jié)靶基因。1）表達水平和翻譯水平的抑制；2）mRNA的被切割，被降解和豐度的下降。

miRNA前體表達克隆的特征

• miRNA前體表達克隆涵蓋了miRBase（16.0版本）中已知miRNA的95%
• miRNA表達框已*測序確證
• 基于慢病毒載體系統(tǒng)的表達克隆可轉(zhuǎn)染未分化細胞和難轉(zhuǎn)化的細胞，獲得與普通分化細胞類似的轉(zhuǎn)染效率
• 提供被轉(zhuǎn)染細胞的存活性的篩選基因，可用于穩(wěn)定或瞬時表達調(diào)控
• 通過應用eGFP可以監(jiān)測病毒和質(zhì)粒載體的轉(zhuǎn)染效率