免疫組化操作步驟

 

　　⑴、石蠟切片脫蠟至水。

 

　　⑵、3%H2O2室溫孵育5-10分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。

 

　　⑶、蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘x2（如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行）。

 

　　⑷、5-10%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10分鐘，傾去血清，勿洗。滴加一抗工作液，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜。

 

　　⑸、PBS沖洗，5分鐘x3次。

 

　　⑹、滴加適量生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃孵育10-30分鐘。

 

　　⑺、PBS沖洗，5分鐘x3次。

 

　　⑻、滴加適量的辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育10-30分鐘。

 

　　⑼、PBS沖洗，5分鐘x3次。

 

　　⑽、顯色劑顯色3-15分鐘（DAB或NBT/BCIP）

 

　　⑾、自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。

 

　　從免疫組化結(jié)果而言，免疫組化技術(shù)服務(wù)主要涉及抗體免疫組化結(jié)果的描述與分析，圖片的確定與選取，相關(guān)數(shù)據(jù)的提供，上述工作是免疫組化工作的重點(diǎn)內(nèi)容，只有嚴(yán)格的免疫組化設(shè)計(jì)，標(biāo)準(zhǔn)的免疫組化操作，專業(yè)化的結(jié)果分析才能更好的滿足客戶的要求，這點(diǎn)對(duì)于形式為腹水，上清，培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。