免疫組化服務的相關問題解析

發布日期： 2022-10-23

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免疫組化服務是通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及相對定量的研究。組織或細胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。

1、出現非特異性背景染色怎么辦？

(1)沖洗不充分解決：每步沖洗3×5

(2)組織中含過氧化物酶未阻斷解決：可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時間延長

(3)組織中含內源性生物素解決：正常非免疫動物血清再封閉

(4)血清蛋白封閉不充分解決：延長血清蛋白封閉時間

2、脫片產生的原因有哪些？

（1）組織切的不好，切的不均勻。

（2）時間短，溫度不夠。

（3）操作不規范，有脫片嫌疑的片子最好不甩或輕輕甩，用衛生紙從邊緣上慢慢吸水。

（4）抗原修復的時候高壓時間過長了。此外，用EDTA修復比檸檬酸容易脫片。

（5）使用PBS的時候盡量用泡的，不要沖。

3、染色陰性怎么辦？

（1）操作步驟錯誤，重新試驗，設立陽性對照

（2）組織中無抗原，設立陽性對照片，以驗證實驗結果

（3）一抗與二抗種屬連接錯誤，仔細確定一抗與二抗種屬無誤

4、蘇木素復染后氨水返藍怎么做?

返藍可以用堿性溶液（PBS/Na2HPO4/淡氨水）或45度溫水.冷水藍化均可。一般藍化5~10min。

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