快速蛋白質染色劑介紹5種經典使用方法

發布日期： 2022-09-19

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　　在蛋白質染色方法中，考馬斯亮藍染色為常用，它克服了氨基黑染色靈敏度不高的限制，又比銀染簡便易操作。可常規方法需使用劇毒的甲醇和強刺激性的乙酸，難為了一眾小白們。快速蛋白質染色劑廠家介紹蛋白質的含量測定有五種經典方法：

　　1、凱式定氮法

　　原理：蛋白質是含氮的有機化合物。蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，蛋白質含量。

　　2、紫外吸收法

　　原理：蛋白質分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm附近具有最大吸收，且各種蛋白質的這三種氨基酸的含量差別不大，因此測定280nm處的吸光度值可用于蛋白質含量的測定。

　　3、雙縮脲法

　　原理：雙縮脲是兩個分子脲經180°C左右加熱，放出一個分子氨后得到的產物。在強堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4,形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵，或通過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。

　　紫色絡合物在540nm處有最大吸收，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。

　　4、Folin-酚試劑法

　　原理：此法是雙縮脲法的發展，在堿性溶液中銅-蛋白質復合物還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑(Folin試劑)，.產生深藍色(鉬藍和鎢藍混合物)。在一定的條件下，藍色深淺與蛋白質的量成正比。

　　5、考馬斯亮藍法

　　原理:考馬斯亮藍G-250染料在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的最大吸收峰的位置由465nm變為595nm，溶液的顏色也有棕黑色變為藍色，在595nm下測定的吸光度值與蛋白質的濃度成正比。