酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測抗原的方法有以下三點

　　

　　酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測抗原的方法有以下三點：

　　1、雙抗體夾心法

　　屬于非競爭結(jié)合，檢測抗原常用的方法，檢測含有至少兩個抗原決定簇的多價抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接;加入待測標(biāo)本，形成固相抗原抗體復(fù)合物;再加入酶標(biāo)抗體形成雙抗體夾心，洗滌;加底物顯色，根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量檢測。

　　

　　2、雙位點一步法

　　針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇，包被使用一種單抗，酶標(biāo)記使用另一種單抗。測定時將待測抗原和酶標(biāo)抗體同時加入，溫育、洗滌，加入底物顯色。若待測抗原濃度過高時，過量的抗原可分別同固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，顯色降低，甚至假陰性。必要時可將標(biāo)本經(jīng)過適當(dāng)稀釋后重復(fù)測定。

　　

　　3、競爭法

　　用于測定小分子抗原，如藥物、激素等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相，然后同時加入待測樣本和酶標(biāo)記的小分子，兩種小分子競爭與固相上的抗小分子的特異性抗體結(jié)合，溫育一定時間后洗滌，加入酶底物顯色。

　　

　　特點：

　　①酶標(biāo)記抗原與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的非標(biāo)記抗原具有相同的與固相抗體結(jié)合的能力；

　　②反應(yīng)體系中，固相抗體和酶標(biāo)抗原是固定*，且前者的結(jié)合位點少于酶標(biāo)記和非標(biāo)記抗原的分子數(shù)量和；

　　③免疫反應(yīng)后，結(jié)合于固相載體上復(fù)合物中被測定的酶標(biāo)抗原的量(酶活性)與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中非標(biāo)記抗原的濃度成反比。