　　腺病毒是一種線性雙鏈DNA病毒，具有宿主范圍廣，可感染分裂和非分裂細胞，制備滴度高、裝載外源基因容量大等優(yōu)點，被廣泛用于生物醫(yī)學基礎研究和臨床試驗中，成為目前常用的基因治療載體之一。腺病毒載體基于血清型5，刪除了E1及E3基因，克隆質粒可以用來表達單基因的轉基因表達，也可用來在雙啟動子或插入的IRES片段控制下的GFP報道的瞬時表達，以進行轉染效率的分析。四環(huán)素誘導載體也可作為控制基因表達的載體。我們在進行腺病毒包裝服務前一定要了解相關的問題：

　　1、腺病毒載體對目的基因的長度是否有要求？

　　有要求。對E1和E3雙缺失的腺病毒載體，比如AdMax的KitC、KitD等，其總包裝的外源片斷要求小于8kb。而對于只有E1缺失或E3缺失的載體，比如KitA、KitB等，外源片斷要求小于5kb。注意，外源片斷指包括啟動子、外源基因和polyA等在內的整個插入片斷。

　　2、我的試驗需要多少總量的腺病毒載體？

　　腺病毒介導外源基因的基因治療研究一般分為體外培養(yǎng)細胞試驗(體外試驗)和動物試驗(體內試驗)兩部分，不同的實驗設計所需要的病毒量也不盡相同。根據(jù)經驗，完成一個完整的腫瘤治療實驗需要腺病毒的病毒量總量約為3×1012VP左右.

　　3、如何提高腺病毒的活性？

　　提高腺病毒的活性，關鍵應該是在病毒包裝過程和擴增過程。純化過程只是去掉有缺陷的病毒和細胞碎片等容易引起機體免疫反應的過程，如果擴增的病毒滴度高，那么純化后就會更高的。

　　4、克隆到轉移載體的基因中的5’和3’UTRs（未翻譯區(qū)）的額外的堿基會影響蛋白表達嗎？

　　UTRs盡可能短一些，特別是在5’要避免在mRNA里形成二級結構。在起始密碼子ATG前面可以加一小段（6-9bp）的堿基序列可以增強目的基因的表達，比如Kozak序列(GCCGCCACCATG)。

　　5、如何判斷腺病毒載體是否能高效感染某種細胞？

　　參照文獻報道是簡單的辦法，也可以用帶報告基因的腺病毒先行預實驗。

　　Ad5能高效感染絕大多數(shù)人類、小鼠等的體細胞（包括分裂和非分裂細胞），比如肝、肌肉、神經組織等。但對血液系統(tǒng)來源細胞和某些腫瘤細胞，比如乳腺癌、白血病細胞等，感染效率較低。

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