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細胞磷酸化蛋白提取的方法
發布日期：
2016-10-19
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3019
磷酸化蛋白檢測試劑盒適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取磷酸化蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。細胞磷酸化蛋白提取：
1.提取液制備：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2.取5-10×106個細胞，在4℃，1000rpm條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
3.用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4.每5×106個細胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5.在4℃，14000rpm條件下離心15分鐘。
6.快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到磷酸化蛋白。
7.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
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